Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者方面缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次消失掉甲自身免疫到消失1改型白血病药理学症状的成果赴援在儿童时期就有比较好的揭示，多个去甲自身免疫感染性的儿童中会有70%在血清转换后10在短期内患白血病，而随访15年的儿童这一比重减低到84%。比起之下，占到药理学1改型白血病一半以上的改型1改型白血病的中风机制还没有赢取充分的学拳法研究。

日渐多的人开始适用分期系统设计来定义1改型白血病的成果：母体在消失多种去甲自身免疫时离开第1期中，消失血糖间歇性时离开第2期中，消失症状时离开第3期中。一些多发去甲自身免疫感染性的母体，在1期和2期，成果慢，并发展为中风的1改型白血病。我们之前揭示了一两组在首次检测到多种去甲自身免疫比对后仅仅10年无白血病的亦非慢成果者，这两组病变次数较少，但特质非常明确。随后，我们发现去甲自身蛋白特异性CD8+T细胞内重排在成果加速的病变中会整体不实际上，但在近期中风和长期实际上的白血病病变中会很不易检测到。这可能会表明，与成果病变比起，这些病变自身免疫重排的调控增强。

早期学拳法研究表明，尽管调控性T细胞内(Treg)数量正常，但白血病病变实际上一些系统设计缺陷，其中会包括对IL-2的重排能力提高。此外，白血病病变中会的振荡CD4+T细胞内可能会对调控不够具抵抗性，体现为振荡T细胞内的可抑制逼近，自然激发的Treg和胃激发的诱导Treg，以及蛋白经历的CD4+T细胞内中会IL-2重排逼近。本学拳法研究的目的是揭示了CD4+调控性T细胞内(Treg)在一个大亦非加速成果者中会的特质，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

原理：BOX学拳法研究是一项以人群为基础的侧向学拳法研究，在21岁以下确诊的病变亲属中会检查1改型白血病的危险因素。我们之前揭示了长期加速成果者的特质，他们始终保持多重去甲自身免疫感染性超过10年，但没有消失白血病的药理学症状，慢性或非顺利进行性自身免疫。随后，10名继续始终保持无白血病并愿意获取大量血液比对的加速成果者纳入T和B细胞内系统设计系统性。在目前的学拳法研究中会，8名慢成果者(SP两组)，中会位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的去甲自身免疫感染性。所有的参与者都处于1改型白血病成果的1期，尽管一些人随后失掉了去甲自身免疫对某些蛋白的感染性重排，然而，一名病变已经处于2期仅仅6年，但没有消失药理学症状，一名病变被诊断为白血病，该受试者72岁，在采集实验比对时，其HbA1c升温到53 mmol/mol(7%)，在研究小组中会对该NADPH顺利进行了单独系统性报告。除去外周血单个氘细胞内(PBMCs)，采用多参数流式细胞内拳法和T细胞内可抑制试验性系统性报告NADPH中会Treg的频谱、表改型和系统设计。适用FlowSOM和CITRUS(聚类认定、比如说和回归)顺利进行无统筹聚类系统性，系统性报告Treg表改型。

结果：与健康NADPH比起，来自慢成果体的失忆CD4+T细胞内的统筹聚类推断，激活的失忆CD4+ Treg频谱减低，与糖皮质激素诱导的TNFR相关蛋白(GITR)隐含减低有关。一名HbA1c升温的病变与成果加速者和转换的依此两组比起，Treg谱有所不同。系统设计系统性表明，与健康NADPH比起，来自加速成果体的Treg依赖性的CD4+振荡T细胞内可抑制明显受损。体现为对振荡CD4+T细胞内CD25和CD134隐含的可抑制减低。

平面图1 深入的表改型系统性推断，CD4+Treg亚改型在慢成果队列中会减低。由FlowSOM转换成的Treg室，聚集在来自所有NADPH的活CD4+CD45RA -细胞内上。根据标有物隐含认定显露10个元簇:失忆T细胞内_1;失忆T cell_2;失忆T cell_3;失忆T cell_4;CD49b失忆T细胞内;HLA-DR + GITR +失忆T细胞内;闪存Treg_1;闪存Treg_2;闪存Treg_3;和闪存Treg_4。(a)适用9个不同Treg标有转换成的10个元簇的MST。每个节点亦然一个炮兵部队(100个炮兵部队)，不够大的元炮兵部队(10个元炮兵部队)在节点两组周围剪裁。每个节点中会的饼平面图暗示单个标有的隐含级别。(b)每个元聚类的热平面图，以推断总体标有隐含。(c, d)为HD两组(c)和SP两组(d)转换成平面图，以及FlowSOM辨别的每个元簇的表层。(e-l)比较同位素为每个metacluster箱子曲新线平面图(同位素> 0.05%)确定为HD和SP两组:闪存Treg_2 (e),闪存Treg_3 (f),闪存Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +失忆T细胞内(h)、失忆T cell_1(i),失忆T cell_2 (j),失忆T cell_3 (k) n d CD49b失忆T细胞内(l)。粉红色圆圈亦然**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩化验。此键适用于平面图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

平面图2 适用CITRUS的预测模改型证实，Treg频谱的减低是成果加速的标志。PG去亦非化(a - f)和柑桔系统性(g-k)比较SP参与者和转换的HD参与者在CD4+CD45RA−T细胞内上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l小团体的亦然性平面图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR隐含顺利进行除去，实时FlowSOM小团体。(b) HD(黑点)和SP(蓝点)两组以及NADPHSP 606(粉红色)中会CD25+ cd127的频谱汇总平面图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+去亦非化子集的箱子曲新线平面图;(c) HLA-DRloGITR−(闪存Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(闪存Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(闪存Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+闪存T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3隐含气压着色，圆点突显露的簇被辨别为SP和HD队列之间的不同。(j)箱子曲新线平面图推断了在SP(蓝点)和HD(灰点)两组中会，CITRUS失忆Treg_3和Treg_4的比较同位素(比重)。(k)直方平面图推断每个簇的表改型(粉红色)和Treg标有比较隐含与故事情节隐含(粉红色);上列，闪存Treg_3;请注意一行，闪存Treg_4。故事情节与所有其他簇中会标有的隐含有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩化验

平面图3 与健康献血者比起，成果加速者失忆treg的GITR减低。每个失忆CD4+T细胞内元簇(失忆T细胞内_1;失忆T cell_2;失忆T cell_3;CD49b +失忆T细胞内;HLA-DR + GITR +失忆T细胞内;闪存Treg_2;闪存Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检测每个隐含标有的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的隐含热平面图(sp606不包括在内)。(c,d)失忆Treg_4元簇中会所有HD(灰色)、所有SP(粉红色)和SP 606(粉红色)的FlowSOM GITR隐含联接，推断直方平面图(c)和汇总平面图(d)。Wilcoxon配对符号秩和化验，p< 0.07(粉红色)所有NADPH包括，p< 0.05(粉红色)NADPHSP 606和转换的HD不包括在测试中会。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中会GITR隐含，从PG去亦非化，从所有HD(灰色)、所有SP(粉红色)和SP 606(粉红色)联接，推断直方平面图(e)和汇总平面图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩化验

平面图4 来自加速成果的CD4+ treg细胞内控制振荡CD4+T细胞内的能力提高。SP两组用粉红色的新线和圆圈暗示，HD两组用金色的新线和圆圈暗示，粉红色的新线/圆圈暗示NADPHsp606。适用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内顺利进行分选。CD4+CD25−(其所答者)被标有为CFSE, Treg按推论的比重滴定。用抗CD3 /28微珠转化细胞内，培养出来3同一天顺利进行流式细胞内拳法检测。(a-d)与CD4+其所答者比较其所的treg培养出来(诱导)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD其所答者培养出来。(a,b,f) CFSE裂解(a,e)和CFSE可抑制倍数(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的可抑制倍数。适用感染性依此(激活的响其所细胞内仅有treg)计算可抑制倍数。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差系统性。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

平面图5 振荡CD4+T细胞内对加速成果的T细胞内转化的可抑制不够敏感。SP两组用粉红色的新线和圆圈暗示，HD两组用金色的新线和圆圈暗示，粉红色的新线/圆圈暗示NADPHsp606。适用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内顺利进行分选。CD4+CD25−(其所答者)被cfsel标有，treg按推论的比重滴定。用抗CD3 /28微珠转化细胞内，培养出来3同一天顺利进行流式细胞内拳法(CD25反染)和细胞内因子系统性。HD Treg与HD、SP或sp606其所答者共同培养出来。(a,b) CFSE裂解(a)和CFSE可抑制倍数(b)。(c,d) CD25可抑制倍数(c)和CD134可抑制倍数(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在研究生院中会的隐含。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差系统性。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

假设：我们得显露的假设是，来自加速成果子的转化失忆CD4+Treg在GITR隐含中会赢取了扩展和丰富，强调了全面性学拳法研究Treg在1改型白血病风险母体中会的关联性的必要性。

原文显露处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28