Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展快速的过程中逐渐扩展

从第一次显现造出去甲自身抗棒状到显现造出1DF冠心病病理症状的令人满意赴援在青少年时期就有很好的揭示，多个去甲自身抗棒状HIV的青少年之中有70%在血液类比后10年内患病冠心病，而随访15年的青少年这一分之一增高到84%。相对于之下，占多数病理1DF冠心病一半以上的DF1DF冠心病的发作机制还没有想得到充分的研究成果。

越来越多的人开始用作分阶段系统来定义1DF冠心病的令人满意：个棒状在显现造出多种去甲自身抗棒状时重回第1期中，显现造出血糖极度时重回第2期中，显现造出症状时重回第3期中。一些多发去甲自身抗棒状HIV的个棒状，在1期和2期，令人满意较慢，并发展为发作的1DF冠心病。我们之后揭示了一一组在首次侦测到多种去甲自身抗棒状样本后据估计10年无冠心病的越来越慢令人满意者，这一组高血压人数少，但形态非常明确。随后，我们发现去甲自身抗体抗体CD8+T细胞质反理应在令人满意很慢的高血压之中也就是说不共存，但在同类型发作和长期共存的冠心病高血压之中很较难侦测到。这显然断定，与令人满意高血压相对于，这些高血压化脓性反理应的缓冲增强。

晚期研究成果断定，尽管缓冲性T细胞质(Treg)需求量正常，但冠心病高血压共存一些动态缺陷，其之中包括对IL-2的反理应控制能力降低。此外，冠心病高血压之中的不稳定性CD4+T细胞质显然对缓冲越来越具抵抗性，乏善可陈为不稳定性T细胞质的减缓移向，连续性诱发的Treg和棒状外诱发的诱发Treg，以及抗体经历的CD4+T细胞质之中IL-2反理应移向。本研究成果的目的是揭示了CD4+缓冲性T细胞质(Treg)在一小群极很慢令人满意者之中的形态，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

法则：BOX研究成果是一项以个体为了将的主干研究成果，在21岁一般而言确诊的高血压配偶之中检查1DF冠心病的危险心理因素。我们之后揭示了长期很慢令人满意者的形态，他们依然多重去甲自身抗棒状HIV超过10年，但没有显现造出冠心病的病理症状，慢性或非开展性化脓性。随后，10名继续依然无冠心病并愿意提供大量血液样本的很慢令人满意者确立T和B细胞质动态分析。在目前的研究成果之中，8名慢令人满意者(SP一组)，之中位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的去甲自身抗棒状HIV。所有的自发性都保持稳定1DF冠心病令人满意的1期，尽管一些人随后失去了去甲自身抗棒状对某些抗体的HIV反理应，然而，一名高血压已经保持稳定2期据估计6年，但没有显现造出病理症状，一名高血压被诊断为冠心病，该受试者72岁，在挖掘造出实验样本时，其HbA1c上升到53 mmol/mol(7%)，在数据分析之中对该供棒状开展了分开风险评估。分离出来外周血单个核细胞质(PBMCs)，采用多参数流式细胞质奥义和T细胞质减缓试验风险评估供棒状之中Treg的阈值、表DF和动态。用作FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和复归)开展无统筹聚类分析，风险评估Treg表DF。

结果：与肥胖症供棒状相对于，来自慢令人满意棒状的思绪CD4+T细胞质的统筹聚类推测，触发的思绪CD4+ Treg阈值增高，与止痛药诱发的TNFR涉及细胞(GITR)回应增高有关。一名HbA1c上升的高血压与令人满意很慢者和匹配的比对一组相对于，Treg谱不尽相同。动态分析断定，与肥胖症供棒状相对于，来自很慢令人满意棒状的Treg介导的CD4+不稳定性T细胞质减缓明显受损。乏善可陈为对不稳定性CD4+T细胞质CD25和CD134回应的减缓增高。

上图1 深入的表DF分析推测，CD4+Treg亚DF在慢令人满意揭示符之中增高。由FlowSOM聚合的Treg室，群聚在来自所有供棒状的活CD4+CD45RA -细胞质上。根据上标物回应鉴定造出10个元簇:思绪T细胞质_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;思绪T cell_4;CD49b思绪T细胞质;HLA-DR + GITR +思绪T细胞质;缓存Treg_1;缓存Treg_2;缓存Treg_3;和缓存Treg_4。(a)用作9个完全相同Treg上标聚合的10个元簇的MST。每个路由器都有一个空降兵(100个空降兵)，越来越大的元空降兵(10个元空降兵)在路由器一组周围上色。每个路由器之中的饼上图回应单个上标的回应层级。(b)每个元聚类的热上图，以推测整棒状上标回应。(c, d)为HD一组(c)和SP一组(d)聚合上图，以及FlowSOM辨别的每个元簇的裂口。(e-l)相较丰度为每个metacluster箱两条路线上图(丰度> 0.05%)确认为HD和SP一组:缓存Treg_2 (e),缓存Treg_3 (f),缓存Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +思绪T细胞质(h)、思绪T cell_1(i),思绪T cell_2 (j),思绪T cell_3 (k) n d CD49b思绪T细胞质(l)。黄色橘色都有**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对记号秩检验。此键适用于上图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

上图2 用作CITRUS的预测模DF证实，Treg阈值的增高是令人满意很慢的标志。分级相关联(a - f)和棉花分析(g-k)比较SP自发性和匹配的HD自发性在CD4+CD45RA−T细胞质上的相似之处。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群棒状的都有性上图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3石英砂，然后通过HLA-DR和GITR回应开展分离出来，仿真FlowSOM群棒状。(b) HD(横纹)和SP(黑斑)一组以及供棒状SP 606(黄色)之中CD25+ cd127的阈值概述上图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+相关联子集的箱两条路线上图;(c) HLA-DRloGITR−(缓存Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(缓存Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(缓存Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+缓存T cell)。(g - i)龙眼簇球状由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3回应准确度上色，箭头突造出的簇被辨别为SP和HD揭示符之间的完全相同。(j)箱两条路线上图推测了在SP(黑斑)和HD(灰点)一组之中，CITRUS思绪Treg_3和Treg_4的相较丰度(分之一)。(k)直方上图推测每个簇的表DF(粉红色)和Treg上标相较回应与背景回应(红色);上列，缓存Treg_3;一个大四人，缓存Treg_4。背景与所有其他簇之中上标的回应有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对记号秩检验

上图3 与肥胖症献血者相对于，令人满意很慢者思绪treg的GITR增高。每个思绪CD4+T细胞质元簇(思绪T细胞质_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;CD49b +思绪T细胞质;HLA-DR + GITR +思绪T细胞质;缓存Treg_2;缓存Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)侦测每个回应上标的发生变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)揭示符的回应热上图(sp606不包括在内)。(c,d)思绪Treg_4元簇之中所有HD(红色)、所有SP(红色)和SP 606(黄色)的FlowSOM GITR回应串联，推测直方上图(c)和概述上图(d)。Wilcoxon配对记号秩和检验，p< 0.07(黄色)所有供棒状包括，p< 0.05(红色)供棒状SP 606和匹配的HD不包括在测试之中。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs之中GITR回应，从分级相关联，从所有HD(红色)、所有SP(红色)和SP 606(黄色)串联，推测直方上图(e)和概述上图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对记号秩检验

上图4 来自很慢令人满意的CD4+ treg细胞质控制不稳定性CD4+T细胞质的控制能力降低。SP一组用红色的两条路线和橘色回应，HD一组用灰色的两条路线和橘色回应，黄色的两条路线/橘色回应供棒状sp606。用作CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞质开展分选。CD4+CD25−(理转发者)被上标为CFSE, Treg按通过观察的分之一硫酸铜。用抗CD3 /28微珠再生细胞质，培育3几天后开展流式细胞质奥义侦测。(a-d)与CD4+理转发者相较理应的treg培育(自棒状)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD理转发者培育。(a,b,f) CFSE诱发(a,e)和CFSE减缓比赴援(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的减缓比赴援。用作HIV比对(触发的响理应细胞质不含treg)计算减缓比赴援。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

上图5 不稳定性CD4+T细胞质对很慢令人满意的T细胞质再生的减缓越来越引人注目。SP一组用红色的两条路线和橘色回应，HD一组用灰色的两条路线和橘色回应，黄色的两条路线/橘色回应供棒状sp606。用作CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞质开展分选。CD4+CD25−(理转发者)被cfsel上标，treg按通过观察的分之一硫酸铜。用抗CD3 /28微珠再生细胞质，培育3几天后开展流式细胞质奥义(CD25反染)和细胞质因子分析。HD Treg与HD、SP或sp606理转发者共同培育。(a,b) CFSE诱发(a)和CFSE减缓百分赴援(b)。(c,d) CD25减缓百分赴援(c)和CD134减缓百分赴援(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培育之中的回应。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们得造出的结论是，来自很慢令人满意子的再生思绪CD4+Treg在GITR回应之中想得到了扩展和丰沛，强调了进一步研究成果Treg在1DF冠心病风险个棒状之中的异质性的全面性。

原文记事：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28